O melanoma é um tipo agressivo de câncer cujo tratamento culmina com o estabelecimento de resistência aos quimioterápicos empregados. Portanto, é importante o desenvolvimento de novos agentes farmacológicos que sejam menos tóxicos e que não provoquem quimiorresistência. As inúmeras propriedades terapêuticas da curcumina vêm sendo confirmadas através de estudos sobre o seu mecanismo de ação em células cultivadas. No presente estudo, empregamos células de melanoma humano da linhagem SK-MEL-37, que desenvolveram resistência in vitro à doxorubicina e cisplatina, drogas normalmente utilizadas na clínica. Investigamos o efeito da curcumina sobre o ciclo celular através de citometria de fluxo. Além disso, análises morfológicas e estruturais também foram realizadas. Os resultados demonstraram que o tratamento com uma concentração de 5 ?M de curcumina provocou uma parada na subfase G0/G1. Além disso, observou-se um aumento dose-dependente na proporção de células hipodiplóides em sub-G0. Eventos apoptóticos típicos foram observados por microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia eletrônica de varredura. Não foi detectada alteração no potencial de membrana mitocondrial. Os resultados indicam que futuros estudos poderão tornar possível a utilização da curcumina como um modulador para agentes quimioterápicos empregados na clínica no tratamento do melanoma.

The aim of this work was to study the effect of curcumin on cell cycle in the human SK-MEL-37 melanoma cell line. In addition, morphological and structural analyses were also performed. Flow cytometric analysis showed a G0/G1 arrest at 5 µM after 24 h exposure and a concentration-dependent increase in the proportion of sub-G0 hypodiploid cells. Typical apoptotic events were also observed by the fluorescence microscopy, transmission and scanning electronic microscopy. Loss of mitochondrial membrane potential was not detected. Results suggested that curcumin could arrest human melanoma cells at G0/G1 phase and induce a mitochondrial-independent apoptotic pathway.

O teste padrão para identificar o potencial cancerígeno de compostos químicos é o estudo de longa duração em roedores, não realizado no Brasil. Nosso laboratório estabeleceu um teste alternativo de média duração (ensaio DMBDD), baseado no paradigma iniciação-promoção da carcinogênese química, adotado pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (Ibama) como fonte oficial de evidências de carcinogenicidade. Nosso objetivo foi avaliar alterações nos éxons 5 a 8 do gene supressor tumoral TP53 e éxons 1 e 2 dos oncogenes H-RAS e K-RAS em lesões hepáticas neoplásicas e pré-neoplásicas observadas no ensaio DMBDD. A identificação dessas eventuais alterações moleculares permitirá o reconhecimento de um possível padrão de alteração em genes críticos, bem como poderão sugerir mecanismos de ação das substâncias testadas no protocolo DMBDD. Sessenta ratos wistar machos foram separados em três grupos: o grupo I não foi tratado quimicamente; o grupo II recebeu os cinco agentes iniciadores da carcinogênese (DMBDD); o grupo III recebeu a iniciação DMBDD seguida de promoção por Fenobarbital. Amostras de DNA (obtidas após avaliação histopatológica de fígado fixado em formalina e incluído em parafina) foram submetidas à técnica da PCR-SSCP (single strand conformation polymorphism). Não foram detectadas mudanças no padrão de bandeamento da SSCP nos diferentes grupos experimentais em nenhum dos éxons estudados. Os resultados sugerem que, em fígado de ratos Wistar machos, mutações nos éxons 5 a 8 do gene TP53 e éxons 1 e 2 dos genes H-RAS e K-RAS não se incluem dentre as alterações moleculares precoces do processo de carcinogênese hepática induzido pelo protocolo DMBDD.

The standard protocol to evaluate the carcinogenic potential of chemicals is the long-term bioassay in rodents, not performed in developing countries due to its high cost and complex operational procedures. Our laboratory has established an alternative medium-term bioassay in Wistar rats, also called DMBDD assay, based on the paradigm initiation/promotion of chemical carcinogenesis. This method was accepted by the Brazilian Environment Agency (IBAMA) as an official source of evidence of carcinogenicity. The aim of this study was to evaluate alterations in exons 5 to 8 of the tumor suppressor gene TP53 and exons 1 and 2 of oncogenes K-RAS and H-RAS in neoplastic and preneoplastic hepatic lesions observed in DMBDD assay. The characterization of these alterations may contribute to the recognition of patterns of damage in critical genes, as well as to suggest mechanisms of action of the compounds tested in the protocol. Sixty male Wistar rats were separated into 3 groups: the first was treated with no chemicals; the second received five initiating agents and the third received initiation followed by phenobarbital. Liver DNA samples (obtained from formalin-fixed and paraffin-embedded tissues after histological analysis) were evaluated by the non-isotopic PCR-SSCP technique. No changes in any analyzed exons were detected by the PCR-SSCP banding pattern in all experimental groups. This result suggests that liver mutations in exons 5 to 8 of TP53 and exons 1 and 2 of H-RAS and K-RAS are not among the early molecular alterations occurring in the hepatic carcinogenesis process induced by the DMBDD protocol in male Wistar rats.